| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 1166-1 | ||||
Resumo:A calcineurina é uma proteína fosfatase ativada por Ca2+/calmodulina, presente em células fúngicas e de animais, que se tornou o foco de pesquisas devido seu papel regulador em diversos processos, incluindo controle do ciclo celular, sinalização de cálcio e resposta aos estresses ambientais. O descontrole na sinalização calcineurina-dependente esta associado com fenômenos hiperproliferativos e câncer. A calcineurina também regula a virulência, sendo necessária para a transição morfogênica levedura-hifa, resposta aos antifúngicos e interação com hospedeiros de vários fungos patógenos incluindo Candida albicans,C. dubliniensis,Aspergillus fumigatus,Magnaporthe oryzaev e Mucor circinelloides. Alguns dos fármacos imunossupressores amplamente usados são os inibidores de calcineurina. Dentre outros imunossupressores empregados clinicamente esta rapamicina, que inibe mTOR e sinalização TOR-dependente, e apresenta também a atividade antifúngica. O vacúolo fúngico é essencial para homeostase e sinalização de Ca2+ e para controle de pH celular, devido a presença de V-H+-ATPase e transportadores de Ca2+, e os mutantes sem V-ATPase são avirulentos. O presente estudo tem como objetivo aprofundar a caracterização dos mecanismos de ação de imunossupressores usando levedura de fissão Schizosaccharomyces pombe (Ascomycota, Taphrinomycotina, Schizosaccharomycetes) como modelo, com ênfase em mecanismos responsáveis pelo controle da proliferação celular relacionados com a sinalização por fluxos iônicos. Especificamente avaliamos o efeito de rapamicina e fingolimode no crescimento celular, funcionamento da rede endomembranar/vacuolar, atividade das V-H+-ATPases e fluxo de H+ em membranas e células de cepas selvagem e mutante ppb1 deficiente de calcineurina. As células foram cultivadas com e rapamicina (50 nM), e para avaliar a participação da V-H+-ATPase foram isoladas as membranas celulares e usado o inibidor concanamicina A. A sensibilidade a rapamicina foi maior em células mutante ppb1, que tiveram crescimento inibido, evidenciando o papel protetor da calcineurina, e sugerindo que sinalização TORC1 é dependente de cálcio. Observamos também as mudanças na polaridade e morfologia celular pela rapamicina. Rapamicina resultou em inibição do transporte de H + mediado pela V-ATPase, indicando que rapamicina interfere com acidificação vacuolar. Assim, esperamos que a caracterização das mudanças no padrão de crescimento e morfologia celular associadas com efeitos sobre H+-ATPase possibilita maior compreensão de mecanismos moleculares que integram os sistemas de controle do pH e de assinaturas iônicas e redox de fenômenos fisiopatológicos proliferativos e infecções fúngicas. Palavras-chave: Antifúngicos, Calcineurina, mTOR, H+-ATPase, Sinalização Agência de fomento:Faperj | |||||